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1. 富含ω-3多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸制备工艺研究
廖妙飞 付万冬 孙继鹏 周宇芳 马明珠 王家星 姚玮 胡诗琦
渔业研究    2022, 44 (6): 599-605.   DOI: 10.14012/j.cnki.fjsc.2022.06.008
摘要135)      PDF (1210KB)(228)    收藏
本研究以南极磷虾油、L-丝氨酸为原料,在磷脂酶D(Phospholipase D-catalyzed,PLD)的催化作用下发生转酰基反应,制得富含二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid,EPA)、二十二碳六烯酸(Decosahexaenoic acid,DHA)的磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)。通过单因素和正交试验,确定了PS的最佳制备工艺条件:以乙酸乙酯为有机溶剂、水相pH 4.5、有机相与水相体积比1︰1、反应温度40℃、加酶量55U、L-丝氨酸与南极磷虾油质量比16︰1、反应时间8 h,在此条件下,PS得率为85.62%,产物中EPA含量为24.33%,DHA含量为19.95%。
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2. 基于枯草芽孢杆菌重组菌株构建技术制备海洋源金属硫蛋白
阎光宇 孙继鹏 易瑞灶 苏永全
   2018, 40 (2): 89-97.  
摘要134)      PDF (3553KB)(619)    收藏
为构建安全高效表达海洋源金属硫蛋白的益生菌重组菌株,以海洋源褶牡蛎内脏团为模板,PCR克隆得到褶牡蛎金属硫蛋白基因(Op-MT),大小为324 bp,经pMD19-T 载体亚克隆到融合表达载体pHT43-SUMO 中,然后通过电转化法将重组质粒转入八种蛋白酶缺陷的宿主枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) WB800N中。SDS–PAGE电泳显示诱导表达的融合蛋白SUMO-Op-MT分子量约为23 kD,与预期一致,说明可溶性融合蛋白SUMO-Op-MT在宿主菌中得到了表达,且通过Western blotting进一步得到验证。同时,HPLC检测重组枯草芽孢杆菌发酵液,结果也表明重组枯草芽孢杆菌成功表达了可溶性目的蛋白Op-MT。通过对重组工程菌中MT活性检测发现,其对重金属镉耐受力增强,说明重组工程菌成功表达出有活性的金属硫蛋白。这为以后开发天然、高效海洋源重金属解毒剂提供理论基础。
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